产品目录

本试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的过氧化物酶活性，尤其适用于测定水果中过氧化物酶活性。

以愈创木酚(又称2-甲氧基酚)作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于分光光度计470nm处测定吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。

过氧化物酶(peroxisome，POD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢，氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用，该酶属于细胞木质素合成途径中间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

• 待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
  
• POD酶液提取时注意低温操作，防止酶活性。
  
• 以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活。
  
• POD氧化剂和POD终止液具有一定腐蚀性，请小心操作。
  
• POD氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。
  
• 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 蒸馏水
  
• 研钵或匀浆器、离心管、低温离心机、水浴锅或恒温箱、分光光度计、比色杯

• 准备样品：
  
  • 植物样品：取0.5～1.0g植物组织或水果中层果肉加入4mL预冷的POD Lysis Buffer研磨或匀浆，离心15～20min，留取上清液，即为POD粗提液，-20℃冻存，用于过氧化物酶的测定。
    
  • 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于过氧化物酶的测定。
    
  • 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用POD Lysis Buffer进行适当匀浆，离心15～20min，留取上清液，即为POD粗提液，-20℃冻存，用于过氧化物酶的测定。
    
  • 高活性样品：如果样品中含有较高活性的过氧化物酶，可以使用POD Lysis Buffer进行恰当的稀释。
• 配制POD Assay Buffer工作液：取适量的POD氧化剂和POD Assay Buffer，按POD氧化剂∶POD Assay Buffer=1∶14混合，即为POD Assay Buffer工作液，即配即用，不宜久置。
  
• POD加样：按照下表设置对照管、测定管。
  

  加入物(mL)	对照管	测定管
  待测样品	0.05(提前煮沸5min)	0.05
  POD Lysis Buffer	1.45	1.45
  POD Assay Buffer工作液	1	1

  • 对照管、测定管中为同一待测样品，但对照管中为提前加热煮沸5min的样品。
    
  • 溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
    
  • 如果样品中的POD活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
    
  • 样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
• POD测定：以对照管为对照(调零)，比色杯光径1.0cm，立即分光光度计测定470nm处测定管的吸光度(记为A_测定0)；37℃准确孵育，立即加入0.05mL POD终止液终止反应(备选方案)，立即分光光度计测定470nm处测定管的吸光度(记为A_测定1)。
  
  • 加入POD终止液终止反应不是必须步骤，可37℃准确孵育后直接以对照管为对照(调零)，分光光度计测定470nm处测定管的吸光度(记为A_测定1)。

• POD活性单位的定义：在该实验条件下，每1min吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。
  
• 计算公式：
  
  • 组织样本POD(U)={(A _测定1-A _测定0)×V_T}/(W×V_S×0.01×t)
    
  • 液体样本POD(U)=(A _测定1-A _测定0)/(0.01×t)
  
  A _测定1=孵育3min后测定管的吸光度
  A _测定0=加入POD Assay buffer工作液后立即测定管的吸光度
  W=组织样本的重量(g)
  V_T=提取酶液的总体积(ml)
  V_S=测定时所用酶液体积(ml)
  t=反应时间(min)=3